化妆品实验室微生物检测的注意事项

化妆品实验室微生物检测的注意事项

主要内容分为两大项：实验室布局和常见问题的问答。
一.   实验室布局
关于化妆品微生物实验室建筑技术的要求，可以参考GB 50346-2011《生物安全实验室建筑技术规范》，其中对生物安全实验室的分级、分类和技术指标做出了很明确的阐述。
二.   常见问题的问答
①.  问：不同培养基的灭菌条件不一致，是否可以合并成一个灭菌条件？
答：根据2015版《化妆品安全技术规范》，培养微生物的培养基灭菌条件有三种，如下表1，如果没有遵从如下灭菌条件，可能会导致最后的培养结果有偏离。
表1  每种微生物培养所需的培养基

培养条件	微生物种类	培养基名称	灭菌条件
36℃±1℃培养48h±2h	菌落总数Aerobic Bacterial Count	卵磷脂、吐温80—营养琼脂培养基	121℃高压灭菌20min
44.5℃±0.5℃培养24h±2h	耐热大肠菌群Thermotolerant Coliform Bacteria	双倍乳糖胆盐（含中和剂）培养基	115℃高压灭菌20min
		伊红美兰（EMB）琼脂	121℃高压灭菌15min
		蛋白胨水（作靛基质试验用）	121℃高压灭菌15min
36℃±1℃、42℃±1℃	铜绿假单胞菌Pseudomonas Aeruginosa	SCDLP液体培养基	121℃高压灭菌20min
		十六烷基三甲基溴化铵培养基	115℃高压灭菌20min
		乙酰胺培养基	121℃高压灭菌20min
		绿脓菌素测定用培养基	115℃高压灭菌20min
		硝酸盐蛋白胨水培养基	115℃高压灭菌20min
		明胶培养基	115℃高压灭菌20min
--	金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus	SCDLP液体培养基	121℃高压灭菌20min
		营养肉汤	121℃高压灭菌15min
		7.5%的氯化钠肉汤	121℃高压灭菌15min
		Baird Parker平板	121℃高压灭菌15min
		甘露醇发酵培养基	115℃高压灭菌20min
28℃±2℃培养5d	霉菌和酵母菌Molds and Yeast Count	虎红（孟加拉红）培养基	121℃高压灭菌20min

②. 问：在实际工作中，由于一些原因导致微生物培养时间与标准规定培养时间不一致，培养结果是否可以接受？
答：同样依据表1，如果培养时间与标准规定培养时间不一致，如实际培养时间多余或少于标准规定的时间范围都会影响试验结果。因为一般的微生物在一个相对稳定的环境中的生长曲线是“S”形，培养时间多一些或少一些可能会对试验结果有重大影响，别人也无法重复试验结果。
③.   问：微生物培养箱能否放置在接种室？
答：不能。会有交叉污染的风险，此外如果接种室是利用臭氧来消毒的话，臭氧会影响培养箱里面正在培养的微生物。
④.   问：霉菌培养箱、细菌培养箱能否放置在同一个房间培养？
答：可以。有条件的话可以分不同的房间。
⑤.   问：霉菌和细菌是否可以用同一个培养箱培养？（分时段单独培养）
答：不可以。通过表2就可知，虽然霉菌培养箱和生化培养箱具备培养细菌、霉菌、酵母菌的能力，但是一般的微生物检测是细菌、霉菌和酵母同时进行，如果用同一个培养箱分时段单独培养很难证明试验结果的有效性；同时，企业的生产一般是连续的，导致微生物检验也是连续的，一个培养箱也满足不了实际质控的要求。
表2 三种培养箱的对比

培养箱种类	适用的微生物	特点
恒温培养箱	细菌	温控范围：室温5℃-60℃，只能把温度稳定在室温以上，不带制冷，不带控湿和不带杀毒功能
霉菌培养箱	细菌、霉菌、酵母菌	双制式冷热控温，有控湿有用杀毒功能
生化培养箱	细菌、霉菌、酵母菌	双制式冷热控温，不带控湿和不带杀毒功能

⑥.   问：如何对培养箱进行消毒？
答：培养箱需要定期消毒。一般的消毒剂为75%的酒精；由于培养箱内胆材料一般为不锈钢，所以不适合用次氯酸钠或苯扎溴铵，因为这些消毒剂对不锈钢有腐蚀性。
⑦.   问：对于外购的培养基，开瓶之后的可以保存多久？
答：对于外购的培养基，开瓶之后的有效期需要经过验证才能确定，一般情况下开瓶之后一年内都可以使用。
⑧.   问：灭菌后的培养基的可以保存多久？
答：灭菌后的培养基的有效期同样也需要验证，一般经验为冰箱4℃可以保持3个月，室温1个月。用来封口的塞子最好是规格统一的，不然验证就没有意义。
⑨.   问：可以使用微波炉来溶解培养基吗？
答：灭菌后的培养基室温放置一段时间后会凝固，使用前需要溶解，通常采用水浴的方式。使用微波炉也可以，不过需要验证。
⑩.   问：培养箱中培养的培养皿是正着放置还是倒着？
答：培养箱中培养的培养皿需倒扣，第一有利于微生物向上吸收营养物质，第二避免培养皿盖上的冷凝水污染微生物。
⑪.  问：什么时候需要做空白对照和阳性对照？
答：微生物试验都要求做空白对照；但是不同的参考标准对阳性对照规定不一样，中国药典规定需要做阳性对照，美国药典、欧洲药典和日本药典没有强制规定。
⑫.   问：一般的微生物检验室需要生物安全柜吗？
答：不一定。微生物检验室的分类及所需的主要设备，如表3。
表3微生物检验室的分类及所需的主要设备

微生物室种类	主要设备
无菌室	超净工作台（或者隔离器），集菌仪；
微生物限度室	超净工作台（或者隔离器），一般薄膜过滤系统，振摇仪（也可以手动振摇不需要配置，根据企业情况），混合器；
阳性室	生物安全柜，混合器。

⑬.   问：该怎么选择合适的生物安全柜？
答：对于实验室生物安全柜的安装及使用，在GB 50346-2011《生物安全实验室建筑技术规范》中有很详细的说明，表4为生物安全实验室选用生物安全柜的原则。为了更多的了解生物安全柜的知识，可以阅读JG 170-2005《生物安全柜》和YY 0569-2011《II级生物安全柜》等资料。
表4生物安全实验室选用生物安全柜的原则

防护类型	选用生物安全柜类型
保护人员，一级、二级、三级生物安全防护水平	I级、II级和III级
保护人员，四级生物安全防护水平，生物安全柜型	III级
保护人员，四级生物安全防护水平，正压服型	II级
保护实验对象	II级、带流层和III级
少量的、挥发性的放射和化学保护	II级B1，排风到室外的II级A2
挥发性的放射和化学保护	I级、II级B2和III级

 
原文来源Intertek 天祥集团： http://www.intertek.com.cn/news-info_14_1676.html 
厦门敏测实验器材公司供应化妆品微生物检测仪器耗材培养基：http://www.xmmc17.com/anquan/238.html
微生物常见问题问答--节选自广东药检所2010药典微生物专题问答http://www.xmmc17.com/anquan/200.html
广东省药检所对《中国药典》2010版微生物专题培训班的有关问题解答。http://www.xmmc17.com/anquan/198.html