水产养殖中弧菌的分离检测(TCBS培养基与弧菌显色培养基）

水产养殖中弧菌的分离检测(TCBS培养基与弧菌显色培养基）

TCBS培养基分离弧菌
国标GB4789.7-2013 食品微生物学检测 副溶血性弧菌检测 中
硫代硫酸盐-柠檬酸盐-胆盐-蔗糖（TCBS）琼脂配方：
酵母膏粉 5g，蛋白胨 10g，氯化钠 10g，柠檬酸钠 10g，硫代硫酸钠 10g，胆酸钠 3g，
牛胆粉 5g，蔗糖 20g，柠檬酸铁 1g，琼脂 15g，溴麝香草酚兰 0.04g，麝香草酚兰 0.04g
最终pH 8.6±0.2
TCBS琼脂的原理就是发现蔗糖发酵产生酸的菌落，霍乱阳性，副溶血性弧菌阴性，
副溶血性弧菌不发酵蔗糖，菌落呈蓝绿色。
霍乱弧菌发酵蔗糖产酸，菌落呈黄色。然后，这些有机酸，也被这种细菌利用，分解成二氧化碳挥发了，有机酸没有了，菌落就重新变成绿色的了。
该培养基中的牛胆粉有抑制其他革兰氏阳性菌的作用，与枸橼酸钠和硫代硫酸钠合用时，对大肠杆菌有明显抑制作用。同时枸橼酸钠和枸橼酸铁可使霍乱弧菌免受其他抑菌剂的作用，加之有营养丰富的酵母浸粉，霍乱弧菌又能利用蔗糖分解产酸，所以菌落较大，且呈黄色。大肠杆菌等杂菌菌落较小或不生长，故易识别。
黄色菌落只要是利用培养基中的蔗糖产酸，菌落就是黄色的，像溶澡弧菌、河流弧菌、麦氏弧菌、等要本培养基上均为黄色菌落，并不是黄色菌落就是霍乱弧菌。样品中常常存在大量可以发酵蔗糖的干扰细菌，常常会碰到整个平板会变黄色的现象。
 
另：霍乱弧菌一旦检出要立即送有关部门，普通实验室是不准保存的！！
黑色：细菌分解含硫物质产生硫化氢同时与培养基中的含铁物质反应,从而产生黑色的菌落.
以上内容来源于食品伙伴网

选用TCBS作为分离培养各种弧菌的培养基，其特异性不是很强；不少细菌在TCBS上也能生长，当生长较慢，需培养24h后方可长成0.5~1mm的黄，绿色菌落。为有效排除干扰，及时准确地判别出是否存在弧菌属细菌，可结合弧菌属细菌在TCBS培养基上生长的特点：弧菌生长快，菌落大，培养4~5h原划线处有菌苔生长，8~10h可长出小菌落，16h菌落可达2mm;其他细菌在TCBS上无此特点。因此，在筛选弧菌属细菌的选择性培养基时要特别注意在确定的培养时间内进行菌落的观察，时间超过即影响其准确性。
以上表2及文字节选自浙江工商大学赵广英等人论文《水产品中多种致病性弧菌的分离鉴定》。

弧菌显色培养基
原理：
目标菌在该培养基上生长，代谢产生特异性的酶与酶底物作用，底物经酶水解作用释放显色基团使菌落显色。霍乱弧菌、拟态弧菌在该培养基上生长菌落呈（淡）蓝绿色，副溶血性弧菌在该培养基上生长菌落呈紫红色。
使用方法：
按说明书使用量（不同厂家重量略有不同）称取培养基于1L蒸馏水或去离子水（可根据实验实际需要配比加水）；充分混匀，加热并不断搅拌至完全溶解，煮沸约2min;
灭菌后的培养基冷却至50摄氏度时，铺平板，待培养基完全凝固后使用。使用前储存于暗处。划线接种后于37℃培养24小时。
保存：干粉培养基于30℃以下阴凉干燥处存放，制备好的平板于2-8℃避光，可保存一周。

说明：
1、同类产品存在不同配方，或采用不同的显色剂，因此菌落形成的颜色不同。
2、副溶血性弧菌在该显色培养基上呈现紫红色菌落；
3、最终结果必须
 
注意：本培养基中含有的成分对人体有毒害作用，使用时请做好防护措施，避免与眼睛、皮肤接触，避免吸入或吞食。
 
        目前有进口科玛嘉弧菌显色培养基（干粉），国产陆桥弧菌显色培养基（干粉），陆桥有新推出弧菌显色培养基平板等产品。
按照国标方法配置的TCBS培养基价格比价便宜。弧菌显色培养基价格相对TCBS比较贵。一块弧菌显色培养基成本大约要十几块，对于虾农来说是一笔不小的开支。不过弧菌显色培养基对于副溶血弧菌等目标菌的分离效果要好于TCBS培养基，开发杀弧菌药品，噬弧菌等的公司可以用来验证药品杀弧菌，特别是杀副溶血性弧菌的验证。市面上水产用的TCBS培养基如果按照国标GB4789.7 TCBS配方生产的产品，也就是常用的黄弧菌，绿弧菌培养基，可能实际上对弧菌的分离效果并不明显，国标4789.7是食品行业的标准，在检出目标菌后一般还有进一步生化鉴定，以确定是哪类弧菌。但虾农并不具备进一步实验的技术和能力，只能根据肉眼判断黄弧菌或者绿弧菌，而无法得知是否是导致虾病的致病弧菌。弧菌显色培养基可以区分副溶血弧菌及其他几种致病菌，对于杀弧菌产品的药品公司有一定针对性，可以用来验证杀弧菌前后几类致病弧菌的数量验证杀弧菌效果。