微生物常见问题问答--节选自广东药检所2010药典微生物专题问答

 微生物常见问题问答（一）

微生物常见问题问答--节选自广东药检所2010药典微生物专题问答。
微生物常见问题，药典培训专题问答，节选内容比较具有代表性，部分内容适用于食品，化妆品微生物行业。

菌落计数是否需要将每天计数的数据登记在记录本上，是否可以只记录最终的数据？
答：可以。每天计数的目的是预防菌落弥漫互相覆盖，干扰最终的点计。你可以用油性笔将每天点计的数记录在培养皿上，发报告时只要最终菌落数就行了。
 
若样品中有不溶物（如片剂中的辅料颗粒），经常会影响培养前期的结果，药典要求逐日计数，所以报告中会出现第二、三日菌落数小于第一日的现象，请问该如何向客户或监检机构解释这种结果？或者是否可以不计第一、二日菌落数，待辅料颗粒与菌落可以区分后再计数？
答：报告书不需要显示第一、第二天的结果，只需报告最终结果。理由请见第9题答复。或者是在营养琼脂中加入TTC试剂（每100ml加入0.1%）
 
采用薄膜过滤法时，滤膜采用何种方法灭菌最好？
答：据我们经验，最好采用一次性过滤器。如果用多次使用的过滤器，则滤膜用湿热灭菌比较好，因为干热灭菌后，滤膜较脆，试验时不容易保证滤膜完整。
 
菌液涂布时，用接种棒还是涂布棒涂？
答：用L型涂布棒，也可用玻棒自制。
 
大肠菌群检查，需阳性对照吗？
答：要的。阳性对照菌为大肠埃希菌。
 
如何避免菌落成片？
答：1、培养基倾注时温度不宜过高，可减少倾注后培养皿里的水蒸汽太多而造成菌落容易漫延，或者加盖“陶瓦盖”吸收水蒸汽；2、细菌计数时，在每100ml营养琼脂培养基中加入灭菌的1%氯化四氮唑0.1ml，可使生成的菌落变红色，容易点计，也可在一定程度上抑制菌落漫延。
 
微生物检验时，匀浆机应把转速调到多少才不会对微生物有损伤？
答：没有相关的规定，目前一般使用转速为3000-4000转/分钟。
 
生物指示剂对灭菌设备的性能，灭菌程序的验证是只验证一次呢，而后进行定期验证，如果生物指示剂换批号，是否要重新验证？
答：应定期或不定期验证一次，确保灭菌设备正常。生物指示剂更换批号，不需重新验证。
 
紫外线灭菌后，需要多久进去操作？
答：打开通风净化设备，半小时后可入内操作。
 
培养基在冷藏中形成结晶怎么处理？①销毁 ②加热再用 ③待冷却完用
答：建议不要使用
 
融化的培养基为什么不能再冷水中冷却？
答：防止受热不均引起结块
 
商品培养基干粉说是加蒸馏水溶解，实际操作是否可以用纯化水或注射用水？
答：只要不含有任何可能抑制或影响微生物生长的物质的水均可。
 
如何检查黑曲霉孢子悬浮液孢子含量为50~100个／ml。铜绿假单胞菌单菌如果用甘油冷冻管，也是低温，是否也会影响它的活性？应如何保存？
答：可用玫瑰红钠琼脂培养基或改良马丁琼脂来确定黑曲霉孢子悬浮液。铜绿假单胞菌应使用最终甘油浓度为20%的甘油冻存管保存，保存在-30℃或更低温度，则可保持其活性。若是斜面或营养肉汤，建议室温保存。
 
第一代菌种可不可以作为工作菌株使用？
 答：我们不这样使用，因为担心菌株没有充分复壮，生化特性可能不典型。
 
制备菌悬液时，要使其在10~100cfu中，应多注意的地方是什么？
答：制定标准化操作规程，减少不同实验者带来的误差，接种量、培养温度和时间应每次一致。
 
铜绿假单胞菌贮存温度应为多少度？
答：一般在10℃以上，甘油冻存管至少在-30℃以下。
 
如何比较快速有效判断菌液的浓度？除了可以用“比浊仪”参考，还有什么方法？
答：比浊仪只做辅助参考，还需通过平板计数来最后确认菌液的浓度。
 
若没有比浊仪，用什么方法来确认50~100cfu/ml？特别是孢子？
答：孢子计数建议通过平板计数的方法来确定浓度。
 
在做方法验证时，黑曲霉菌浓度大于20cfu/皿时，培养5天后菌落蔓延扩散，无法各个区分，如何在药典要求的50~100cfu和实际操作结果中找到平衡？因为菌浓对回收率及操作RSD%影响很多.
答：培养48-72h后，菌落刚形成时，及时点计并做记号，然后每天观察有无新的菌落长出并计数。
 
大肠生化实验中的靛基质试验（I）项结果为“+”或者“-”均不影响最终结果的判断，请问该项的意义何在？是否可以取消？
答：反应为+，为典型大肠埃希氏菌，-为非典型大肠埃希菌。关系到最终判断，都是必须的实验，不可取消。
 
铜绿假单胞菌用什么方法保存及更活处理方法？
答：建议采用甘油冻存管（终浓度为20%的甘油冻存管），-30℃（或更低温度）保存。
 
革兰氏染色前，菌落是否要先纯化（接到营养琼脂斜面上）还是直接从选择性培养基上挑起菌落直接染色？
答：要纯化，从选择性培养基挑取单个菌落，最好先接到营养琼脂斜面后，再进行染色。
 
请介绍一下，有什么简便的方法灭菌甘油？
答：高压湿热灭菌法
 
 20%甘油v∕v是用水还是用相应培养基做稀释？
答：用相应的培养基。
 
清洁无菌室所用消毒液如何做到无菌拖把、拖桶如何做到无菌？
答：消毒液可采用过滤的方法。无菌拖把、拖桶可采用浸泡、高温灭菌的方法。
 
贵所日常所用的消毒液是哪些？
答：新洁尔灭、消毒粉、75%酒精、来苏儿。
 
消毒液本来就是用来消毒杀菌的，又怎么会存在消毒液是否无菌这一说法？
答：消毒液不是万能的，对绝大对数菌有效，不排除对有些微生物无效。  有些消毒剂质量难保证，如果有效成分浓度过低甚至无，则达不到灭菌效果。
 
能否直接用电磁炉煮培养基（加热）？最佳加热方法是？
答：电磁炉不能加热玻璃瓶。我们所：水浴（100℃），微波炉。
 
生物安全柜，净化操作台每年是否需要检定？
答：是的，我所是每年检定一次。并定期检测洁净度，频次自己制订。
 
洁净区监控中，某些设备不宜采用冲淋法和接触碟法取样，而擦拭法中棉签释放率很低（普通棉签释放率只有20%左右）。请问如何设计采样方法才能真实反映设备表面微生物情况？
答：有些国外生产微生物检验仪器的大公司，有专用的小拭子，可能更有效。
 
洁净区有霉菌生长，要怎么净化环境？注：我们用75%的乙醇抹洗全部空间，然后开臭氧半小时，但是检测后还是发现有霉菌，老师是不是还有更好的方法？
答：可尝试甲醛熏蒸

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