培养基溶解配制用水加热灭菌PH废弃处理问题集锦

培养基溶解配制用水加热灭菌PH废弃处理问题集锦

1、培养基配制用水
培养基配制用水最好是蒸馏水，用纯净水和去离子水有可能会影响最终结果，原因在于：用于制备纯净水和去离水的原水中如果存在大量的微生物的话，虽然在制备过程中能够除去微生物，但不能除去微生物代谢产物，这些代谢产物可能会影响或抑制细菌的生长！另外，水的电阻率在25℃时应≥300000Ω•cm。具体可参考SN/T1538.1-2016.培养基制备指南 第一部分：实验室培养基制备质量保证通则[S]。
GB4789.28中规定实验用水的电导率在25℃时不应超过25 μS/cm(相当于电阻率≥0.4 ΜΩcm)，除非另有规定要求。水的微生物污染不应超过10³ CFU/mL。
pH 5.5-7.5，否则可能造成培养基颜色异常、产生沉淀或凝胶强度下降。
储存于惰性容器（如：玻璃、聚乙烯材质容器）中，容器应清洗干净，
防止抑制剂残留。
 
2、培养基配制温度
湿热灭菌在高压锅或培养基制备器中进行，高压灭菌一般采用121 ℃±3 ℃灭菌15 min，具体培养基按食品微生物学检验标准中的规定进行灭菌。培养基体积不应超过1000 mL，否则灭菌时可能会造成过度加热。加热后采用适当的方式冷却，以防加热过度。这对于大容量和敏感培养基十分重要，例如含有煌绿的培养基。
某些培养基不能或不需要高压灭菌，可采用煮沸灭菌，如SC肉汤等特定的培养基中含有对光和热敏感的物质，煮沸后应迅速冷却，避光保存；有些试剂则不需灭菌，可直接使用（参见相关标准或供应商使用说明）。
 
3、培养基配制容器
制备培养基常用的容器为玻璃、不锈钢、铝锅或搪瓷容器。不宜使用铜或铁锅。培养基中的含铜量过高时（＞0.3mg/1000ml），细菌不易生长；含铁量过高时（＞0.14mg/1000ml），则妨碍细菌毒素的产生。
 
4、培养基溶解
小心称量所需量的脱水合成培养基（必要时佩戴口罩或在通风柜中操作，以防吸入含有有毒物质的培养基粉末），先加入适量的水，充分混合（避免在湿度过高的环境下操作，防止培养基受潮结块），然后加水至所需的量后适当加热，并重复或连续搅拌使其快速分散，必要时应完全溶解。含琼脂的培养基在加热前应浸泡几分钟。
有颗粒剂的培养基推荐使用颗粒剂培养基，减少粉尘吸入。
加水溶解后，应适当加热并搅拌，加快培养基的溶解。推荐使用带加热功能的磁力搅拌器加速溶解。
 
5、培养基煮沸加热
培养基煮沸灭菌用的什么加热工具
答1：我们用磁力加热搅拌器，一般用来煮500ml的，可能我们样品量少
答2：我们用电磁炉，放在带刻度的不锈钢缸子里煮，加热的时候用药匙搅拌
答3：为您提供一种快速便捷的方式
第一步：采用微波炉适当加热，短时间（10s左右）多次加热溶解，避免溢出。第二步：在电炉上继续加热至沸腾
电炉，按需配置一定量装锥形瓶，垫石棉网煮沸，不间断拿下摇匀，避免溢出。
答4：用过老式电炉+石棉网、电热套、微波炉、电陶炉；综合安全和效率，觉得还是电陶炉好用些
 
6、培养基复溶
经过高压灭菌的培养基应尽量减少重加热时间，避免过度加热。培养基融化后放入47±2℃的恒温水浴锅中保温，直至使用，放置时间一般不应超过4h。*如果不能在4h内及时使用，应迅速冷却，使其凝固，使用前再进行复溶。
未用完的培养基不能重新凝固留待下次使用。敏感的培养基尤其应该注意，融化后时间应尽量缩短；* 不可反复复溶，否则会影响培养基的pH值和凝胶强度。
恒温水浴链接：
 
7、培养基灭菌
高压灭菌、煮沸灭菌、过滤除菌（采用0.2μm的滤膜）
注：用高压灭菌的方式对培养基进行灭菌时，应对培养基的灭菌过程进行监控。
• 物理监控和生物监控   （灭菌指示胶带，湿热灭菌生物指示剂链接：）
 
8、培养基分装
储存于惰性容器（如：玻璃、聚乙烯材质容器）中；将培养的培养基分装至容器中，培养基的体积不超过所用容器的3/5；培养基灭菌时，总体积应小于1000ml；液体培养基如乳糖胆盐发酵培养基分装时可使用大容量电子移液器或电子分液器。
 
9、培养基PH测定
灭菌前后测定培养基的pH值；pH ±0.2；
1 mol/L的 NaOH 或 Hcl来调整pH值；
商品化的培养基一般不需要调整pH值，但需测定pH是否在规定范围内。
固体培养基PH计可使用固体培养基专业PH计
 
10、培养基保存
干粉培养基的保存遵循先进先出的原则、保存开封的记录、超过保质期的培养基需丢弃、
开盖后密封，低于25℃保存、储存时避免吸水，氧化，污染。
 
11、废弃培养基处理
所有污染和未使用的培养基的弃置应采用安全的方式，并且要符合相关法律法规的规定。
网友推荐程序：
一、经培养的污染材料及废弃物应放在严密的容器或铁丝筐内，集中放在统一地点，待统一进行高压灭菌。
二、经微生物污染的培养物，须经121℃30分钟高压灭菌；
三、染菌后的吸管、加样枪头，使用后放在5%煤酸皂溶液中，最少浸泡24小时，再经121℃30分钟高压灭菌；
四、涂片染色冲洗片的液体，一般可直接冲入下水道，烈性菌的冲洗液必须冲在烧杯中，经高压灭菌后，方可倒入下水道。染色玻璃片放入5%煤酸皂中浸泡24小时，煮沸洗涤。做凝集试验用的玻片或平皿，须经高压灭菌后再洗涤；
五、 打碎的培养物，立即用5%煤酸皂溶液喷洒和浸泡被污染部位，浸泡半小时后再擦试干净；
六、污染的工作服或进行烈性菌试验所穿的工作服、帽、口罩等，应放在专用的消毒袋内，经高压灭菌后方能洗涤。
 
其他培养基相关内容问答
标签：培养基、高压灭菌，乳糖胆盐、分开灭菌
问：1、“请教你一个培养基高压灭菌的问题。说明书上：平板计数培养基加热溶解121摄氏度灭菌15分钟，乳糖胆盐发酵管培养基经115摄氏度15分钟灭菌。我想问下，我把2者一同在高压锅灭菌121到126摄氏度时间20分钟，这样可以吗？或2者一同在高压锅灭菌121到126摄氏度时间15分钟可以吗？”
答：-----不可以，乳糖胆盐发酵管培养基经115摄氏度15分钟灭菌的目的是防止高温导致多糖碳化。
问：“觉得2个培养基分开灭菌觉得浪费，再一起灭菌不知怎样做才标准”？
-答：----没有规矩不成方圆。不可一起灭菌。
 
标签：培养基配制
问：在进行煮沸灭菌培养基配置过程中如何避免液体喷洒出来被烫伤的情况，有什么好的灭菌方法，又可以有效防护？
答：选择大一点的容器，少盛放点培养基，防护最好放上石棉网，带上高温手套，有专人看守。
 
标签：培养基，（试剂）验收程序
问：4.6.1a)要求制定培养基（试剂）验收程序；4.6.1b)要求制定培养基质量控制程序。
是否可以只制定培养基（试剂）质量控制程序，内容包括验收及自制培养基的质量控制。
答：贵实验室自制培养基吗？如果是，则执行GB 4789.28-2013   6.1。
如果否，如使用商业干粉培养基，则执行GB 4789.28-2013    6.2即可
商品化培养基按附件E进行质量控制
 
标签：培养基保温
问：灭菌后培养基的保温能否用60℃的培养箱，它与45~55℃水浴锅保温方法有何不同？
答：----最好使用45~55℃水浴锅保温方法；
----前者“气保”，后者“水保”。
 
标签：培养基,PH计
问:请问下商品化的培养基验收时，要测试PH值，有些琼脂灭菌后25℃时已经凝固了，是否可以在灭菌前进行？
答：使用穿插式PH计或平头电极，有专业的固体培养基专用电极可测固态琼脂pH
 
问：Vrba培养基勿需高压灭菌的原因是什么 ？
答：VRBA即结晶紫中性红胆盐琼脂具有一定的选择性，不易生长杂菌，在其上面只大肠菌群显色，其它的菌落不会显示颜色的。再说，煮沸也是灭菌。
VRBA菌落显红色的原理是菌株利用乳糖产酸，中性红遇酸变红，因此菌落也是红色的，并且因为里面有胆盐，在较低pH值时会出现沉淀环，就是我们看到的菌落周围的晕圈了。
但某些不利用乳糖产酸的细菌如沙门在VRBA表面生长时是无色的，但是跑到培养基内部就会变成红色了，这种菌会影响我们的判断，因此需要做BGLB来确证。
 
培养基配制用什么容器
问：每天需要用大量培养基，用2L烧杯配制还是嫌小了，如果用大的不锈钢锅，每批就可以配很大量，不知道有什么不符合的说法吗？是分装到三角烧瓶或者试管再灭菌的。主要考虑到批次管理，所以想一次性用一个大锅来溶解干粉，以锅作为一个实验室培养基批次。不知道是否可行？
答：可以的，先用一个大的不锈钢配制好，然后分装到三角烧瓶或试管在灭菌
追问：每个月有一两天需要配制上千瓶培养基，考虑分装的问题，有谁使用过蠕动泵之类的分装设备啊？从配制到灭菌之间的时间怎么控制才好？记得USP里面有规定2小时内，但是分装的量大呀……
答：可以考虑培养基分装器（蠕动泵）
 
问：培养基煮沸灭菌（无需高温高压）具体都怎么操作。比如煮沸过程要加塞子么，煮沸后直接进入无菌室冷却倒板还是放水浴锅等等
答：煮沸过程当然要盖上啊，但是不建议用塞子，可以用锡纸啊，另外有时刻看着啊
 煮沸后直接进入无菌室冷却倒板还是放水浴锅等等，应该都可以吧！！反正是冷却过程啊
 
问：怎样制作斜面培养基呢
答：配制固体培养基，分装入试管，包扎，灭菌，摆斜面，冷却即可
主要把握分装的量~~
 
问：一个培养箱，培养两种不同温度的培养基，怎么培养？
答：你说的可能是细菌培养、霉菌培养，这要两个培养箱，霉菌培养不仅有温度要求还有湿度要求。
其他回答：做无菌检查至少要2个培养箱
 
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